在這里您可以檢索產(chǎn)品與服務(wù)的常見(jiàn)問(wèn)題，并找到答案。也可以進(jìn)入資源與支持欄目，在產(chǎn)品手冊(cè)頁(yè)面下載FAQ電子版手冊(cè)。
Cre-ERT2小鼠是一類(lèi)含有雌激素受體（estrogen receptor，ER）的配體結(jié)合區(qū)突變體（ERT）與Cre重組酶的融合蛋白表達(dá)的小鼠。Cre-ERT2在無(wú)Tamoxifen誘導(dǎo)的情況下，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)處于無(wú)活性狀態(tài)；當(dāng)Tamoxifen誘導(dǎo)后，Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT（雌激素類(lèi)似物）與ERT結(jié)合，可使Cre-ERT2進(jìn)核發(fā)揮Cre重組酶活性。
Tamoxifen給藥建議如下：
1. 他莫昔芬的配置和儲(chǔ)存
他莫昔芬不溶于水，一般建議用玉米油溶解：可按照20mg/ml的終濃度進(jìn)行配置，37℃搖晃過(guò)夜。由于玉米油太多會(huì)導(dǎo)致他莫昔芬溶解度變差，所以建議一次配置50mL以內(nèi)的他莫昔芬溶液，配置完成后分裝成1mL每管，-20℃避光保存，使用時(shí)避免反復(fù)凍融，正常半年內(nèi)都是可以使用的。此外，他莫昔芬對(duì)光敏感，在制備和儲(chǔ)存過(guò)程中需要注意避光處理。
?
他莫昔芬和玉米油的品牌較多，我們常用的如下，僅作參考：
Tamoxifen?(Sigma‐Aldrich)：CAS?#?10540-29-1?
玉米油 (Sigma‐Aldrich)?CAS# 8001-30-7
?
2. 他莫昔芬的給藥劑量及頻次
對(duì)于成年小鼠（4周齡以上），他莫昔芬的推薦劑量為75mg/kg-120mg/kg。120mg/kg是我們現(xiàn)在使用比較普遍的一個(gè)劑量，一般注射3-5次（我們常用5次），隔天一次；75mg/kg是我們做過(guò)的最低劑量，但是給藥需要持續(xù)5次。幼鼠劑量可以降到100mg/kg。孕鼠及老齡鼠（大于6月齡）的劑量也需要適當(dāng)減少。
?
3. 他莫昔芬的給藥方式
他莫昔芬可以通過(guò)腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應(yīng)用最廣泛的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準(zhǔn)，便于控制。
腹腔注射給藥流程：正確抓取小鼠，將小鼠的鼻子朝向地面，露出腹部；定位動(dòng)物的中線并將腹部分成四個(gè)象限，特別是動(dòng)物的右下象限，是腹腔注射的合適位置（右下象限缺少重要的解剖結(jié)構(gòu)）；多次腹腔注射時(shí)，應(yīng)交替注射部位。
注：Tamoxifen會(huì)影響胎兒發(fā)育和生產(chǎn)，孕鼠誘導(dǎo)的時(shí)間盡量選擇孕晚期，并同時(shí)注射孕酮來(lái)減少流產(chǎn)概率。
灌胃給藥的給藥劑量和頻率與腹腔注射相同，在正式實(shí)驗(yàn)前，建議同學(xué)們先反復(fù)練習(xí)，熟練掌握灌胃給藥的技巧。
飲食/飲水給藥使用較少，主要是他莫昔芬水溶性差，小鼠的給藥劑量不好量化，且需要的誘導(dǎo)時(shí)間較長(zhǎng)（一般需要幾周進(jìn)行誘導(dǎo)），在誘導(dǎo)期間往往還伴隨著小鼠體重的下降（約10-15%）。
4. 注意事項(xiàng)
A.?他莫昔芬注射完成后不建議立刻開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，一般來(lái)講，停藥后需要繼續(xù)飼養(yǎng)7天，再安排后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
B.?對(duì)照組小鼠需要同步進(jìn)行不含他莫昔芬的玉米油溶液給藥。
C.?未處理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分籠飼養(yǎng)，小鼠舐舔到他莫昔芬懸液，梳毛等行為可能導(dǎo)致意外敲除。
D.?加熱不會(huì)導(dǎo)致Tamoxifen失效，37℃過(guò)夜溶解他莫昔芬是沒(méi)有問(wèn)題的。
?
最后，不同的實(shí)驗(yàn)方案、不同的小鼠品系、不同的組織器官等對(duì)于給藥劑量、給藥頻率和給藥方式等的要求往往是不同的，因此，上述方法只是一個(gè)參考，面對(duì)具體實(shí)驗(yàn)時(shí)，同學(xué)們還應(yīng)根據(jù)參考文獻(xiàn)、實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最佳方案。
參考文獻(xiàn)：Feil S, Valtcheva N, Feil R. Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009;530:343-63. ?doi: 10.1007/978-1-59745-471-1_18. PMID: 19266339.
有沒(méi)有發(fā)現(xiàn)，當(dāng)你在查詢或看paper時(shí)，往往會(huì)蹦出幾個(gè)賊長(zhǎng)的，還夾雜著數(shù)字、上標(biāo)、符號(hào)的名稱(chēng)，比如：129-Trp53tm1Holl/J、FVB-Tg(PomcCre)5Brn...... 看上去很復(fù)雜的樣子。這些其實(shí)是基因工程小鼠的全名。
如果把這一長(zhǎng)串字符解構(gòu)一下，常見(jiàn)的基因工程小鼠可以分為兩種命名方式：
基因定點(diǎn)修飾的小鼠命名，比如：敲除、敲入、點(diǎn)突變等等。
隨機(jī)轉(zhuǎn)基因的小鼠命名
這一類(lèi)小鼠的名稱(chēng)基本長(zhǎng)這樣：
下面我們對(duì)這些組成部分逐一說(shuō)明~
如果是在單一的小鼠背景上完成的基因修飾，并且在繁育過(guò)程中未引入其它品系，那么就可以以品系全稱(chēng)來(lái)表示。比如：
如果是在混合品系背景上，那么可以用這幾個(gè)品系（<3個(gè)）縮寫(xiě)，并以分號(hào)作為間隔。分號(hào)前表示受體，分號(hào)后表示供體。比如：在一個(gè)來(lái)自C57BL/6與129雜交 ES 細(xì)胞系上定點(diǎn)敲除某個(gè)基因，就可以用B6;129表示。直至這個(gè)品系與 C57BL/6 小鼠回交至近交系程度，那么可以改寫(xiě)為B6.129。
如果供體品系是混合背景或有未知來(lái)源，那么回交至受體品系的近交系程度后，可以用.Cg來(lái)表示，比如：B6.Cg。
如果存在3個(gè)以上祖系或有未知來(lái)源的混合遺傳背景，那么以STOCK來(lái)表示。
這里的基因名用的是 Gene Symbol。Gene Symbol 和 Gene Name 到底有什么區(qū)別呢？
Gene Symbol 有以下特點(diǎn)：
物種中唯一的
短，3-5個(gè)字母，最多不超過(guò)10個(gè)字母
只用羅馬字母和阿拉伯?dāng)?shù)字
大寫(xiě)字母開(kāi)頭，后跟小寫(xiě)字母或數(shù)字
不包括組織特異性或分子量
最好跟 Gene Name 的首字母一致
斜體表示
不同物種的同源基因使用相同的 Gene Symbol
Gene Name 則一般有以下特點(diǎn)：
簡(jiǎn)短，可以是幾個(gè)單詞，包含基因功能或特點(diǎn)
首字母小寫(xiě)（人名或?qū)Ｓ忻~除外）
使用美式拼寫(xiě)方法
舉個(gè)例子你就明白啦，例如：
Shh 是 Gene Symbol，而 sonic hedgehog 則是它的 Gene Name。
所以，如果你想查找某個(gè)基因的敲除品系，那么最好輸入 Gene Symbol，而不是 Gene Name 或者曾用名。
這里特別提一下定點(diǎn)過(guò)表達(dá)的這類(lèi)情況：
目前最常用的兩個(gè)定點(diǎn)過(guò)表達(dá)的整合位點(diǎn)，一個(gè) Rosa26位點(diǎn)，一個(gè)是 H11位點(diǎn)。
Rosa26是一個(gè)基因，所以可以用它的 Gene Symbol，也就是 Gt(ROSA)26Sor。
H11并不是某一個(gè)特定基因，而是存在于兩個(gè)基因之間的一個(gè)特定染色體位置，所以沒(méi)有 Gene Symbol。目前公認(rèn)的命名是 Igs2，表示 intergenic site 2 的縮寫(xiě)。
tm：對(duì)于 ES 細(xì)胞打靶途徑獲得品系，用 tm 表示 targeted mutation。
em ：對(duì)于 CRISPR/Cas9 或 TALEN 等核酸酶系統(tǒng)介導(dǎo)的基因修飾品系，用 em 表示 endonuclease-mediated mutation。
這里的編號(hào)是指在該實(shí)驗(yàn)室中，對(duì)該基因修飾的序列號(hào)。
例如：Trp53tm1Holl表示在Holl實(shí)驗(yàn)室對(duì)Trp53基因進(jìn)行的第一次突變。
有時(shí)候會(huì)看到 tm1.1、tm1.2的情況，這是指條件性基因敲除（CKO）小鼠在與生殖系重組酶工具鼠交配后獲得的子代小鼠品系，為了與親代 CKO 小鼠（編號(hào)為 tm1）區(qū)分。而親代 CKO 小鼠與其它組織特異性重組酶工具鼠交配的子代就不單獨(dú)命名了。
對(duì)于基因敲除和條件性基因敲除，在命名中一般不加入插入結(jié)構(gòu)的部分，即編號(hào)后緊跟實(shí)驗(yàn)室代號(hào)。
例如：Trp53tm1Holl。
如果有敲入的基因，可以在括號(hào)內(nèi)寫(xiě)出插入的外源基因。
例如：Cd19tm1(cre)Labcode表示在 Cd19基因中敲入 Cre基因。
如果敲入的是 RNAi，那么把RNAi針對(duì)的靶點(diǎn)寫(xiě)進(jìn)括號(hào)中。
例如： Genetm#(RNAi:Il23a)Labcode 。
一般實(shí)驗(yàn)室代號(hào)是機(jī)構(gòu)名稱(chēng)的首字母縮寫(xiě)。
比如：
J 表示 The Jackson Laboratory；
Kyo 代表 Kyoto University ；
Smoc 代表上海南方模式生物；等等。
這一類(lèi)小鼠的名稱(chēng)基本長(zhǎng)這樣，命名中Tg代表 Transgene。
在括號(hào)中填入轉(zhuǎn)入的基因的啟動(dòng)子信息以及 Gene Symbol。
指該實(shí)驗(yàn)室制備的轉(zhuǎn)基因 founder 編號(hào)或系列編號(hào)。
如果使用轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)來(lái)制備轉(zhuǎn)基因小鼠的話，那么命名時(shí)在 Tg 后面加上 Tn，表示 transposable element。隨后的括號(hào)內(nèi)，一般需要包括：所使用的轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)縮寫(xiě)，以及構(gòu)建的載體結(jié)構(gòu)，兩者用“-”鏈接：TgTn(transposon_class_abbreviation-vector)#Labcode。
例如：B6.Cg-TgTn(sb-lacZ,GFP)IF2Jtak/JtakRbrc，其中 sb 是 sleeping beauty的縮寫(xiě)。
知道了基因工程小鼠的命名規(guī)則，你可能又要問(wèn)了，名字這么長(zhǎng)總不能每次都寫(xiě)全名吧？確實(shí)，通常在文章中對(duì)所用的基因工程小鼠進(jìn)行表述時(shí)，我們可以采用簡(jiǎn)寫(xiě)的方式。具體可以怎么寫(xiě)呢？
大家很熟悉了，可以分別用加、減號(hào)上標(biāo)來(lái)表示 wildtype allele 與 mutant allele：
KO 純合子 Gene-/-
KO 雜合子 Gene+/-
野生型對(duì)照 Gene+/+ 或 WT (wildtype)
將敲入的元件寫(xiě)在上標(biāo)里，例如：
Shh 基因 E177A 點(diǎn)突變雜合子：ShhE177A/+
如果 Shh 基因敲入報(bào)告基因或Cre重組酶基因，可以寫(xiě)成 ShhEGFP/+，或者也可以直接寫(xiě)成 Shh-EGFP、Shh-Cre。
一般直接寫(xiě)出表達(dá)的基因結(jié)構(gòu)，例如：
Villin promoter 驅(qū)動(dòng) EGFP 報(bào)告基因的轉(zhuǎn)基因小鼠就可以表示為 Vil-EGFP。
將 flox 作為上標(biāo)表示，比如：
CKO 純合子 Geneflox/flox 或 Genef/f
CKO 雜合子 Geneflox/+ 或 Genef/+
如果與廣泛表達(dá) Cre 或生殖系表達(dá) Cre 工具鼠交配后獲得了全身敲除的小鼠，那么可以按 KO 小鼠的規(guī)則來(lái)簡(jiǎn)寫(xiě)。
如果與組織特異性 Cre 小鼠交配，那么可以組合寫(xiě)成：Geneflox/flox；Cre。
如果文章中只用到一種組織特異性 Cre 工具鼠，也可以按 KO 的方式簡(jiǎn)寫(xiě)，即 Gene-/- 可以表示 flox 純合子且 Cre 陽(yáng)性小鼠。
如果有多種不同的 Cre，那么就需要分別表示了。
例如：Tlr5 flox 小鼠分別與小腸上皮細(xì)胞（IEC）特異性 Cre（Vil-Cre）、 DC 細(xì)胞特異性 Cre（CD11c-Cre）交配的子代中發(fā)生基因敲除的純合子小鼠可以分別表示為 Tlr5flox/flox；Vil-Cre 和 Tlr5flox/flox；CD11c-Cre。如果覺(jué)得這樣寫(xiě)太麻煩，也可以這樣表示：Tlr5ΔIEC 和 Tlr5ΔDC。
關(guān)于基因工程小鼠的命名原則大致先介紹到這里，使用基因工程小鼠的過(guò)程中有任何問(wèn)題，歡迎與我們溝通。
技術(shù)熱線：400-728-0660
郵件咨詢：tech@modelorg.com
國(guó)際業(yè)務(wù)：service.us@modelorg.com
一般可通過(guò)PCR+ 測(cè)序方法進(jìn)行基因型鑒定。示意圖如下：
圖10. A. 野生型小鼠PCR 產(chǎn)物測(cè)序峰圖。B. 陽(yáng)性F0 代小鼠基因型鑒定PCR 產(chǎn)物測(cè)序峰圖。CRISPR/Cas9 作用后，由于發(fā)生同源
重組修復(fù)(HR) 的同時(shí)，也可能發(fā)生非同源重組修復(fù)(NHEJ)。因此，切點(diǎn)附件可能出現(xiàn)雜峰現(xiàn)象。C. 陽(yáng)性F1 代小鼠基因型鑒定PCR
產(chǎn)物測(cè)序峰圖。陽(yáng)性F1 小鼠基因組一個(gè)拷貝是野生型，一個(gè)拷貝是突變體，在Cas9 作用位點(diǎn)附近區(qū)域測(cè)序，突變點(diǎn)位置有雙峰現(xiàn)
象（野生型和突變體，兩種基因型產(chǎn)生了兩種峰型）。C’ 和C” 為C 圖測(cè)序PCR 產(chǎn)物鏈接T-vector 后，單克隆測(cè)序結(jié)果。其中，C’
為野生型，C” 為突變體。峰型對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)C” 較C’ 的目的突變點(diǎn)CCT 突變?yōu)镚TT，C’ 和C” 峰型結(jié)果可以和C 圖峰型結(jié)果相吻合。
對(duì)于NHEJ 隨機(jī)修復(fù)獲得的基因敲除小鼠，一般可通過(guò)PCR+ 測(cè)序方法進(jìn)行基因型鑒定。示意圖如下：
圖9. A. 野生型小鼠PCR 產(chǎn)物測(cè)序峰圖。B. 陽(yáng)性F0 代小鼠基因型鑒定PCR 產(chǎn)物測(cè)序峰圖。CRISPR/Cas9 作用后，由于發(fā)生NHEJ
隨機(jī)修復(fù)，產(chǎn)生多種基因型，在Cas9 切點(diǎn)附近出現(xiàn)雜峰現(xiàn)象。C. 陽(yáng)性F1 代小鼠基因型鑒定PCR 產(chǎn)物測(cè)序峰圖。陽(yáng)性F1 小鼠基因
組一個(gè)拷貝是野生型，一個(gè)拷貝是突變體，在Cas9 作用位點(diǎn)附近區(qū)域測(cè)序有后雙峰現(xiàn)象（兩種基因型產(chǎn)生了兩種峰型）。C’ 和C” 為C. 圖
測(cè)序PCR 產(chǎn)物連接T-vector 后，單克隆測(cè)序結(jié)果。其中，C’ 為野生型，C” 為突變體。峰型對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)C” 較C’ 缺失了兩個(gè)堿基
CC。C’ 和C” 峰型結(jié)果可以和C 圖峰型結(jié)果向吻合。
引物設(shè)計(jì)可參考以下圖示方案。
圖8. A. 鑒定Flox 小鼠中Neo 基于是否去除；B. 鑒定在特定組織中目的基因是否被敲除。
引物設(shè)計(jì)可參考以下圖示方案。
圖7. A. 基于ESC 打靶的三引物鑒定方案；B. 基于ESC 打靶的二引物鑒定方案；C. 基于CRISPR/Cas9 的鑒定方案。
在進(jìn)行基因型鑒定PCR 時(shí)通常采用粗抽提的方法從鼠尾組織中提取基因組DNA，這類(lèi)抽提方法獲得的基因組DNA 含
有較多雜質(zhì)，可能會(huì)影響后續(xù)PCR 的效率?？梢钥紤]優(yōu)化抽提方法，保證基因組DNA 質(zhì)量。在PCR 反應(yīng)體系中，基
因組DNA 的濃度也會(huì)影響PCR 的效率。基因組DNA 過(guò)多或過(guò)少都有可能導(dǎo)致PCR 擴(kuò)增失敗?？梢钥紤]調(diào)整PCR 反
應(yīng)體系。若PCR 鑒定出現(xiàn)非特異性條帶，可以考慮提高退火溫度，以提高引物的特異性結(jié)合。
基因工程小鼠基因型PCR 鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組
DNA 為模板進(jìn)行PCR，并以凝膠電泳比對(duì)比不同基因型特異產(chǎn)物的大小，根據(jù)條帶大小來(lái)區(qū)分小鼠的不同基因型。
研究表明小鼠模型中Cre 表達(dá)也會(huì)有毒副作用，例如不育和存活力降低。某些品系的Cre 純合子小鼠尤其是這樣。
Cre 活性過(guò)高可能引起在基因組中未知的loxP 位點(diǎn)重組，從而引發(fā)敲除或移位進(jìn)而影響小鼠存活。另外，在通過(guò)顯微
注射獲得的Cre 轉(zhuǎn)基因品系中，Cre 基因插入可能干擾某些重要內(nèi)源基因的功能。
已研究的大部分品系中，Cre 表達(dá)與從哪個(gè)親本遺傳的Cre 基因無(wú)關(guān)。但對(duì)某些品系而言，從母本遺傳Cre 基因的小
鼠相較于從父本獲得Cre 基因的小鼠，其Cre 重組效率更高，例如EIIa-Cre 品系。
